انتقال ژن به سلولهای کبدی رده lmh جوجه بوسیله لنتی ویروسهای نوترکیب

Authors

عباس رحیمی

موسی گردانه

مسعود علی پناه

یاسین پناهی

abstract

لنتی ویروسها از جمله موثرترین ویروسهای نوترکیب برای انتقال ژن به سلولها و بافتهای پستانداران بشمار میرود. در این مطالعه، عملکرد لنتی ویروسهای انسانی را در انتقال ژن خارجی به سلولهای طیور بررسی کردیم. سه ناقل لنتی ویروسی بنامهای ناقل انتقال (ناقل ترانسفر حامل ژن گزارشگر gfp)، ناقل بسته بندی و ناقل غشائی را همزمان به سلولهای مولد ویروس (رده hek-293t) منتقل کردیم. سوپرناتان سلولهای ترانسفکت شده را پس از 24 و 48 ساعت جمع آوری نموده از فیلتر گذراندیم. سپس آن را به ستونهای پروتئینی amicon حاوی فیلتر 100 کیلو دالتونی منتقل کرده و بخش اعظم سوپرناتان را با استفاده از سانتریفوژ از نمونه ها جدا کردیم. بدین ترتیب استوکی در حجم 500 µl از سوپرناتان غلیظ شده و مملو از ویریونها را بدست آوردیم. برای ترانسدوکشن سلولهای کبدی جوجه رده lmh رقتهای مختلفی از این استوک ویروسی تغلیظ شده را به محیط کشت این سلولهای در حال رشد اضافه کردیم. 48 ساعت بعد آلودگی سلولی و بیان ترانسژنهای گزارشگر را مشاهده کردیم که میزان بیان آنها 96 ساعت پس از آلودگی به 100% افزایش یافت. نتایج مزبور نشان میدهد که سلولهای با منشاء جوجه را نیز میتوان بوسیله لنتی ویروسهای با منشاء انسانی آلوده ساخت. همچنین با توجه به نیاز به تیتر بالای ویروس برای انتقال موفقیت آمیز ژنها، روش فیلتراسیون تیتر بالایی از ویروس را تولید میکند و از نظر کارایی قابل مقایسه با روشهای سنتی از جمله روش اولتراساتریفوژ بوده و از نظر هزینه، حجم کار و زمانبری بر آنها ارجحیت دارد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

انتقال ژن gfp به سلول های کبدی جوجه با استفاده از وکتورهای لنتی ویروسی نوترکیب

امروزه توجه خاصی به تولید پروتئین های نوترکیب از تریق ایجاد حیوانات تراریخته برای مصارف پزشکی و درمانی می شود. در سیستم های یوکاریوتی به دلیل تولید محصول بسیار مشابه با محصول طبیعی مورد توجه محققان قرار گرفته است. اما پیچیدگی ساختار سلولی در یوکاریوت ها، دستکاری و انتقال ژن در آن را دشوارتر می کند. امروزه پرنده ها به عنوان بیوراکتورهای تولید کننده پروتئین های دارویی مورد توجه خاص محققان قرار گر...

15 صفحه اول

بیان القایی ژن گزارشگرGFP در رده سلولی LMH با استفاده از ناقلین لنتی ویروسی القا پذیر

هدف: با تلفیق سیستم االقایی تتراسیکلین (Tet-inducible system) و ناقلین لنتی ویروسی، القا بیان ژن گزارشگر Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) در سلول‏های پرندگان مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش‏ها: ژن EGFP تحت کنترل سیستم‏ Tet-ON قرار گرفت و بیان آن در سلول‌های کبدی جوجه رده LMH بررسی شد. ابتدا باکتری‏های مستعد با ناقل لنتی ویروسی القایی حامل EGFP به‏همر...

full text

ساخت لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن gdnf و بیان آن در سلولهای انسانی

بیماری پارکینسون دومین بیماری شایع در بین بیماری های زوال نورونی در اکثرکشورهای جهان است که حدود 1% جمعیت بالای 65 سال را گرفتار می کند. دلیل اصلی به وجود آمدن این بیماری تخریب پیش رونده نورون های دوپامین ساز در ناحیه substantia nigra pars compacta (snpc) در مغز میانی می باشد زیرا این سلول ها دوپامین می سازند و دوپامین یک نوروترانسمیتر شیمیایی است که سیگنال ها را به ناحیه striatumو سپس به نواحی...

15 صفحه اول

تولید لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن فاکتور نوروتروفیک gdnf با تیتر بالا و انتقال آنها به آستروسیتهای انسانی

لنتی ویروسها از جمله موثرترین ویروسهای نوترکیب برای انتقال ژن به سلولها و بافتهای پستانداران بشمار میرود. این مطالعه شامل دو بخش اساسی است: (1) بررسی کارائی ستونهای پروتئینی در تولید لنتی ویروسهای نوترکیب با تیتر بالا و (2) بکارگیری این ستونها درتولید لنتی ویروسهای نوترکیب حامل ژن فاکتورنوروتروفیک gdnf. در بخش اول مطالعه با استفاده از دو ناقل انتقال (حامل gfp یا jred) تولید لنتی ویروس نوترکیب ک...

full text

قابلیت ترانسفکشن و ترانسدوکشن سلول‏های جوجه رده LMH و مقایسه آن با سلول‏های انسانی رده HEK-293T

هدف: هدف از این مطالعه بررسی کارائی جذب DNA و انتقال ژن به سلول‏های کبدی جوجه نژاد لگهورن در دو سطح ترانسفکشن و ترانسدوکشن با لنتی ویروس‏های نوترکیب و شدت بیان ترانسژن می‏باشد. مواد و روش‏ها: برای ترانسفکشن یا ترانسدوکشن ویروسی، سلول‏ها در پلیت‏های 96 خانه کشت داده شدند و در مراحل مختلف با میکروسکوپ فلورسنس مشاهده گردیدند. تعداد سلول‏های GFP (Green Fluorescent Protein-positive) با نرم...

full text

بیان القایی ژن گزارشگرgfp در رده سلولی lmh با استفاده از ناقلین لنتی ویروسی القا پذیر

هدف: با تلفیق سیستم االقایی تتراسیکلین (tet-inducible system) و ناقلین لنتی ویروسی، القا بیان ژن گزارشگر enhanced green fluorescent protein (egfp) در سلول‏های پرندگان مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش‏ها: ژن egfp تحت کنترل سیستم‏ tet-on قرار گرفت و بیان آن در سلول های کبدی جوجه رده lmh بررسی شد. ابتدا باکتری‏های مستعد با ناقل لنتی ویروسی القایی حامل egfp به‏همراه یک ناقل دوم که فعال کننده tet (t...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
زیست فناوری دانشگاه تربیت مدرس

Publisher: دانشگاه تربیت مدرس

ISSN

volume دوره 1

issue شماره 1 2010

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023